FPLC中的离子交换色谱解释

离子交换色谱(IEX)是一种常用的蛋白质纯化技术。这是一种独特的色谱技术，利用溶液中分子与离子固相的相对结合来竞争结合。

在这篇博文中，KNAUER详细解释了FPLC应用离子交换色谱的原理。bob电竞下载

离子交换色谱简介

离子交换色谱法是根据蛋白质的电荷来分离蛋白质。不同的离子交换器被用来利用带电荷的蛋白质对相反电荷的固定相的吸附特性。

离子交换色谱的第一阶段是用适当的缓冲液进行平衡，缓冲液的pH值会影响蛋白质的净电荷。在一定的pH值下，溶液中所有带电分子的净电荷都接近于零。这被定义为它们的等电点。一般来说:

pH值水平超过蛋白质的pI会产生一个负电荷
pH值低于蛋白质的pI会产生一个正电荷

离子交换色谱利用这一特性来分离不同的生物分子，使用缓冲液保持恒定的pH值(从而保持恒定的净电荷)和离子交换器(带正电荷或负电荷的固定基质)。例如:阳离子柱用于分离带有负电荷的目标蛋白。反之亦然，用阴离子柱，带正电荷的生物分子就被纯化了。

下一个关键参数是离子强度，或盐梯度，用于创建正确的分离条件。最初的结合发生在低离子强度条件下，因此盐浓度低。从柱中的洗脱蛋白必须逐渐增加盐的浓度。第一个从柱洗脱的蛋白质结合最弱，而更强结合的蛋白质需要更高的盐浓度洗脱。精确的梯度形成对成功地通过阴离子或阳离子交换色谱分离蛋白质是必不可少的。

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