我可以结合哪些方法来实现自动两步净化?

两步净化系统可以很容易地用于结合两种方法的净化策略。经典的方法是将捕获与抛光步骤相结合。下表列出了第一步和第二步的一些示例。原则上任何方法都可以结合使用。在设计两步策略时,请考虑第一步的洗脱条件应与第二步的起始条件相匹配。两步纯化的典型例子是his标记蛋白的纯化。捕获这些蛋白质的步骤是通过固定金属离子亲和层析完成的。用咪唑洗脱。下一个逻辑步骤可以很容易地集成在一个两步设置是脱盐柱交换缓冲。这样就可以去除咪唑,降低离子强度。

一步

模式

方法

捕获

  • 标签亲和性(例如GST, Strep-Tag)
  • 抗体亲和力(如蛋白A、蛋白G)
  • 固定金属离子亲和(IMAC)(如Ni-NTA, Talon)
  • 离子交换色谱法

中间/抛光

  • 尺寸排阻色谱法
  • 脱盐/缓冲交换
  • 离子交换色谱法
  • 疏水作用色谱法

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